外泌体蛋白质组学血清胞外囊泡中的原发性硬

胆管癌（CCA），又称胆道癌，是一种由胆道上皮细胞癌变所造成的恶性肿瘤，包括多种胆道系统癌症，预后较差。原发性硬化性胆管炎（PSC）和胆管结石等可能是主要的致病因素。目前临床上的无创诊断方法很难区分肝内胆管癌（iCCA）和肝细胞癌（HCC）。这是因为，目前尚无可用于PSC,CCA和HCC的精准的无创诊断生物标志物。

为了筛选新的生物标志物，本研究从CCA(n=43),PSC(n=30),HCC(n=29)病人和健康个体（对照组，n=32）中分离出血清胞外囊泡（EV）。西班牙研究人员运用纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）发现，HCC血清胞外囊泡浓度明显高于其他各组。圆形的外形（透射电镜），大约nm的直径尺寸（NTA）和CD9,CD63,CD81标志物（免疫印迹法）等特征表明，大多数血清胞外囊泡是外泌体。

图1.CCA、PSC、HCC和健康对照组的血清胞外囊泡的比较分析

基于质谱的蛋白质组学分析鉴定到很多种在各组间差异表达的蛋白质。其中一些差异表达蛋白显示出较高的诊断价值：CCAvscontrol的最大ROC曲线下面积（AUC）为0.，CCAstagI-Ivscontrol为0.，PSCvscontrol为0.，PSC（非肝硬化）vscontrol为0.，CCAvsPSC为0.，CCAstagI-IvsPSC为0.，HCCvscontrol为0.，iCCAvsHCC为0.。

CCAvscontrol0.CCAstagI-Ivscontrol0.PSCvscontrol0.PSCnon-cirrhoticvscontrol0.CCAvsPSC0.CCAstagI-IvsPSC0.HCCvscontrol0.iCCAvsHCC0.

表1：各组比较相应的ROC曲线下面积（AUC）

图2.CCA、PSC、HCC和健康对照组的血清胞外囊泡的差异蛋白质组学分析

随后，研究人员对人胆管癌细胞系和正常人胆管细胞所分泌的胞外囊泡进行蛋白质组学分析，发现人胆管癌细胞的胞外囊泡中含有更高丰度的致癌蛋白。

图3.正常（NHC）和SV40永生化（H69）人胆管细胞和人胆管癌细胞（EGI1和TFK1）释放的胞外囊泡的比较分析

图4.正常（NHC）、SV40永生化（H69）人胆管细胞和人胆管癌细胞（EGI1和TFK1）的全细胞提取物（WCE）和胞外囊泡(EV)蛋白的差异蛋白质组学分析

进一步，在免疫缺陷小鼠的肝脏中原位植入人胆管癌细胞后，含有类似致癌蛋白的胞外囊泡会释放入小鼠血清。

图5.在人类胆管癌原位移植小鼠模型的血清胞外囊泡中鉴定人类同源蛋白质

研究人员得出结论，血清外泌体蛋白质组学技术筛选出的CCA、PSC和HCC疾病的新型蛋白质标志物，可以作为潜在的有效的诊断工具。

研究思路:

人血清胞外囊泡的比较分析→人血清胞外囊泡的差异蛋白质组学分析→体外培养细胞胞外囊泡的比较分析→体外培养细胞全蛋白和外泌体蛋白差异蛋白质组学分析→异源移植小鼠模型验证

蛋白质组学技术：Labl-fr定量蛋白质组

样品类型：

(1)CCA、PSC、HCC和健康对照组的血清胞外囊泡

(2)正常（NHC）、SV40永生化（H69）人胆管细胞和人胆管癌细胞（EGI1和TFK1）的全细胞提取物（WCE）和胞外囊泡

(3)小鼠疾病模型的血清胞外囊泡

原文

Srumxtracllularvsiclscontainprotinbiomarkrsforprimarysclrosingcholangitisandcholangiocarcinoma.Hpatology.May26.PubMdPMID:.

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长按







































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